PCR නොහොත් පොලිමරේස් දාම ප්‍රතික්‍රියාව යනු DNA අනුක්‍රම විස්තාරණය කිරීමට භාවිතා කරන තාක්‍ෂණයකි.එය ප්‍රථම වරට 1980 ගණන් වලදී වැඩි දියුණු කරන ලද්දේ 1993 දී රසායන විද්‍යාව සඳහා වූ නොබෙල් ත්‍යාගයෙන් පිදුම් ලැබූ කේරි මුල්ලිස් විසිනි.PCR මගින් අණුක ජීව විද්‍යාව විප්ලවීය වෙනසක් සිදු කර ඇති අතර, කුඩා සාම්පල වලින් DNA විස්තාරණය කිරීමට සහ එය සවිස්තරාත්මකව අධ්‍යයනය කිරීමට පර්යේෂකයන්ට හැකි වේ.
PCR යනු තාප චක්‍රයක සිදුවන තුන්-පියවර ක්‍රියාවලියකි, ප්‍රතික්‍රියා මිශ්‍රණයක උෂ්ණත්වය වේගයෙන් වෙනස් කළ හැකි යන්ත්‍රයකි.එම පියවර තුන නම් denaturation, annealing සහ extension වේ.
පළමු පියවරේදී, denaturation, ද්විත්ව නූල් DNA ඉහළ උෂ්ණත්වයකට (සාමාන්‍යයෙන් 95 ° C පමණ) රත් කර එම කෙඳි දෙක එකට තබා ඇති හයිඩ්‍රජන් බන්ධන බිඳ දමනු ලැබේ.මෙහි ප්‍රතිඵලය වන්නේ තනි කෙඳි සහිත DNA අණු දෙකක්.
දෙවන පියවරේදී, annealing, උෂ්ණත්වය සෙල්සියස් අංශක 55 ක් පමණ දක්වා පහත හෙලනු ලබන අතර එමඟින් ප්‍රයිමර් වලට තනි කෙඳි සහිත DNA මත අනුපූරක අනුපිළිවෙලට අනුපූරක අනුක්‍රමණයට ඉඩ සලසයි.ප්‍රයිමර් යනු ඉලක්කගත DNA මත ඇති උනන්දුව අනුපිළිවෙලට ගැලපෙන පරිදි නිර්මාණය කර ඇති කෙටි DNA කොටස් වේ.
තුන්වන පියවරේදී, දිගුවේදී, Taq polymerase (DNA පොලිමරේස් වර්ගයක්) ප්‍රයිමර් වලින් නව DNA පොටක් සංස්ලේෂණය කිරීමට ඉඩ සලසා දීම සඳහා උෂ්ණත්වය 72°C පමණ දක්වා ඉහළ නංවනු ලැබේ.Taq polymerase සෑදී ඇත්තේ උණු දිය උල්පත් වල ජීවත් වන බැක්ටීරියාවකින් වන අතර PCR හි භාවිතා වන අධික උෂ්ණත්වයට ඔරොත්තු දිය හැකිය.
PCR හි එක් චක්‍රයකට පසුව, ප්‍රතිඵලය වන්නේ ඉලක්කගත DNA අනුක්‍රමයේ පිටපත් දෙකකි.චක්‍ර ගණනාවක් (සාමාන්‍යයෙන් 30-40) සඳහා පියවර තුන පුනරුච්චාරණය කිරීමෙන් ඉලක්කගත DNA අනුක්‍රමයේ පිටපත් සංඛ්‍යාව ඝාතීය ලෙස වැඩි කළ හැක.මෙයින් අදහස් කරන්නේ පිටපත් මිලියන ගණනක් හෝ බිලියන ගණනක් නිපදවීමට ආරම්භක DNA කුඩා ප්‍රමාණයක් පවා විස්තාරණය කළ හැකි බවයි.
PCR පර්යේෂණ සහ රෝග විනිශ්චය සඳහා බොහෝ යෙදුම් ඇත.ජාන සහ විකෘති වල ක්‍රියාකාරිත්වය අධ්‍යයනය කිරීමට ජාන විද්‍යාවේදීත්, DNA සාක්ෂි විශ්ලේෂණය කිරීමට අධිකරණ වෛද්‍ය විද්‍යාවේදීත්, රෝග කාරක පවතින බව හඳුනා ගැනීමට බෝවන රෝග නිර්ණය කිරීමේදීත්, භ්‍රෑණවල ප්‍රවේණික ආබාධ සඳහා පරීක්‍ෂා කිරීමට පූර්ව ප්‍රසව රෝග විනිශ්චයේදීත් එය භාවිතා වේ.
PCR ප්‍රමාණාත්මක PCR (qPCR) වැනි වෙනස්කම් ගණනාවක භාවිතය සඳහා ද අනුවර්තනය කර ඇත, එමඟින් DNA ප්‍රමාණය මැනීමට සහ ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීමේ PCR (RT-PCR), RNA අනුක්‍රම විස්තාරණය කිරීමට භාවිතා කළ හැක.
එහි බොහෝ යෙදුම් තිබියදීත්, PCR හි සීමාවන් තිබේ.එයට ඉලක්ක අනුපිළිවෙල පිළිබඳ දැනුම සහ සුදුසු ප්‍රයිමර් සැලසුම් කිරීම අවශ්‍ය වන අතර ප්‍රතික්‍රියා තත්ත්වයන් නිවැරදිව ප්‍රශස්ත කර නොමැති නම් එය දෝෂයකට ගොදුරු විය හැකිය.කෙසේ වෙතත්, ප්‍රවේශමෙන් පර්යේෂණාත්මක සැලසුම් කිරීම සහ ක්‍රියාත්මක කිරීමත් සමඟ, PCR අණුක ජීව විද්‍යාවේ වඩාත් ප්‍රබල මෙවලමක් ලෙස පවතී.
පසු කාලය: පෙබරවාරි-22-2023